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                      慢病毒Lenti

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                      慢病毒載體(Lentivirus)是一類改造自人免疫缺陷病毒(HIV)的病毒載體,是逆轉錄病毒的一種,基因組是RNA,其毒性基因已經被剔除并被外源性目的基因所取代,屬于假型病毒??衫媚孓D錄酶將外源基因整合到基因組中實現穩定表達,具有感染分裂期與非分裂期細胞的特性。
                      慢病毒基因組進入細胞后,在細胞漿中反轉錄為DNA,形成DNA整合前復合體,進入細胞核后,DNA整合到細胞基因組中。整合后的DNA轉錄成mRNA,回到細胞漿中,表達目的蛋白;或產生小RNA。慢病毒介導的基因表達或小RNA干擾作用持續且穩定,并隨細胞基因組的分裂而分裂(圖1)。


                      圖1 慢病毒作用機制
                      慢病毒載體具有宿主范圍廣,免疫原性低,基因容量大,可以長期表達等特點。能夠有效地感染培養的腫瘤細胞、肝細胞、心肌細胞、神經元、內皮細胞、干細胞等多種類型的細胞。
                      慢病毒的感染具有整合特性,能夠將外源基因有效地整合到宿主染色體上,達到持久性表達,因而可構建穩轉細胞株,用于基因的細胞功能研究。使用慢病毒載體改造T細胞可用于CAR-T細胞治療,CRISPR/Cas9文庫構建使用的也是慢病毒載體。

                      慢病毒包裝與純化
                      慢病毒包裝采用三質?;蛩馁|粒系統進行包裝,收集細胞培養上清,通過超速離心濃縮純化和收集病毒。
                      慢病毒滴度檢測
                      檢測方法:定量PCR檢測干擾后細胞基因組中外源DNA拷貝數
                      實驗原理:慢病毒介導外源基因以逆轉錄方式整合進目的細胞基因組
                      慢病毒載體優勢
                      ① 表達時間長:慢病毒可將外源基因整合到宿主細胞基因組上,實現基因長時間穩定的表達,不隨細胞分裂傳代而丟失,是細胞實驗的首選,常用于構建穩轉株。
                      ② 安全性高:未發現致病性,慢病毒載體改造T細胞用于CAR-T細胞治療。
                      ③ 免疫原性低:直接注射活體組織不易造成免疫反應,適用于動物實驗。

                      不同病毒載體特點
                       


                      載體選擇
                      和元上海擁有豐富的慢病毒產品,用于操作編碼基因和非編碼基因,如lncRNA、microRNA、circRNA,如下慢病毒載體可供您選擇(不限于此列表):

                      常規應用
                      體外感染細胞
                      慢病毒載體能夠有效地感染培養的腫瘤細胞、肝細胞、心肌細胞、神經元、內皮細胞、干細胞等多種類型原代細胞和大部分細胞系。
                      慢病毒的感染具有整合特性,能夠將外源基因有效地整合到宿主染色體上,因而可以達到持久性表達,從而構建穩轉細胞株,用于基因的細胞功能研究。

                      慢病毒體外感染細胞的效果圖

                      常見MOI列表
                       


                      MOI值:
                      MOI 是multiplicity of infection 的縮寫,即感染復數,其含義是感染時病毒與細胞的數量比值,一般以實驗中某個細胞,感染達到80%,定義為這個細胞的MOI值,即病毒量與細胞數的比值;加的病毒量(μl)=細胞數×MOI/滴度(…/ml) ×1000

                       

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