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                      逆轉錄病毒

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                      逆轉錄病毒(Retrovirus),又稱反轉錄病毒,是一種RNA病毒,該病毒呈球形,有包膜,表面有刺突,顆粒直徑為100nm左右。逆轉錄病毒基因組有三個基因:gag-編碼病毒的核心蛋白;pol-編碼逆轉錄酶;env-編碼病毒的被膜糖蛋白。


                      逆轉錄病毒基因組(圖片來源:Kimball's Biology Pages)
                      1)逆轉錄病毒包裝和純化 逆轉錄病毒包裝采用三質?;蛩馁|粒系統進行包裝,收集細胞培養上清,通過超速離心濃縮純化和收集病毒。
                      逆轉錄病毒包裝流程 逆轉錄病毒滴度檢測: 檢測方法:定量PCR檢測干擾后細胞基因組中外源DNA拷貝數。 實驗原理:慢病毒介導外源基因以逆轉錄方式整合進目的細胞基因組。


                      2)逆轉錄病毒侵染細胞過程 逆轉錄病毒基因表達時,需在逆轉錄酶的作用下首先將RNA逆轉錄成DNA,形成DNA整合前復合體,隨后進入細胞核隨機整合到宿主細胞DNA上,經過轉錄、翻譯,完成基因的表達。


                      逆轉錄病毒作用機制(圖片來源:Kimball's Biology Pages)
                      3)逆轉錄病毒特點 逆轉錄病毒的最大特點在于其特異性感染分裂期細胞,這是因為只有當被感染細胞處于細胞分裂期間,逆轉錄病毒DNA基因組才能接觸到宿主細胞的遺傳物質。 基于上述特性,逆轉錄病毒適用于干細胞相關的大量研究,如神經干細胞研究、造血干細胞研究。體內應用時,逆轉錄病毒適用于研究成年新生神經元或膠質前體細胞的工作。

                      表1 不同病毒的生物學特性比較


                      4)逆轉錄應用案例 1、腦室下區&少突膠質細胞前體 客戶發表文章:Scientific Reports. (IF=4.122). Xiong Y S,et.al. (2015). Early treatment of minocycline alle-viates white matter and cognitive impairments after chronic cerebral hypoperfusion. [逆轉錄病毒, 卒中]


                      注射部位:小鼠側腦室SVZ區 載體:pROV-EF1a-GFP 病毒載體:逆轉錄病毒 病毒滴度:1× 108 cfu/mL 注射體積:1ul
                      2、同一細胞分裂的姐妹神經元 應用案例:Nature.(IF=41.577).Yu YC,et.al. (2009).Specific synapses develop preferentially among sister excitatory neurons in the neocortex. [逆轉錄病毒, 發育]

                      注射部位:E12-E13小鼠胚胎 病毒載體:逆轉錄病毒 注射體積:1ul

                       

                       

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