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                      外泌體RNA測序

                      目    錄
                      • 產品介紹
                      • 常見問題
                      • 經典案例
                      • 結果展示

                      背景簡介

                      外泌體(Exosome)是由包括腫瘤細胞在內的幾乎所有類型的細胞都可以產生并釋放的一種微囊,其內部包裹了DNA,RNA,蛋白等物質。眾多的研究表明,外泌體在血液,乳汁,尿液等體液內傳播,其內容物如miRNA可被其他細胞吞噬,成為細胞間通訊的重要介質。越來越多的證據表明,宿主細胞或腫瘤細胞分泌的外泌體參與了腫瘤發生、生長、侵襲和轉移。        外泌體上述特征和生物學功能,使其成為液體活檢領域的重要研究對象,其所含RNA分子如miRNA,lncRNA,circRNA等是極具應用前景的臨床診斷分子標志物。聯川生物依托豐富的RNA項目經驗和領先的生信分析實力,推出了針對外泌體RNA研究的系統解決方案,將協助科研人員深度開展外泌體mRNA、miRNA、lncRNA等的鑒定和功能分析.

                      技術優勢

                      國內最早的外泌體研究科技服務商,外泌體RNA項目經驗豐富
                      芯片和測序兩大高通量檢測平臺,滿足外泌體RNA的不同分析需求
                      采用更低樣本量和專業外泌體分離試劑盒,更能勝任外泌體實驗的獨特性
                      多套外泌體RNA研究方案,滿足外泌體mRNA,lncRNA,miRNA的不同研究需求

                      技術路線

                      分析內容

                        

                      樣本類型

                      血清(≥2 mL),血漿(≥ 2 mL),細胞上清液(≥ 15 mL),
                      乳汁(≥10 mL),尿液(≥ 15 mL),無DNA污染的總RNA等
                      建議總RNA起始量(單次):≥1 μg,濃度≥ 20 ng/μL (原則上越多越好)


                      近期用戶文章 
                      1. Gu Y, Li M, Wang T, et al. Lactation-Related MicroRNA Expression Profiles of Porcine Breast Milk Exosomes[J]. Plos One, 2012, 7(8):e43691.
                      2. Gildea J J, Carlson J M, Schoeffel C D, et al. Urinary exosome miRNome analysis and its applications to salt sensitivity of blood pressure.[J]. Clinical Biochemistry, 2013, 46(12):1131-1134.
                      3. Yelamanchili S V, Lamberty B G, Rennard D A, et al. MiR-21 in Extracellular Vesicles Leads to Neurotoxicity via TLR7 Signaling in SIV Neurological Disease[J]. Plos Pathogens, 2015, 11(7):e1005032.
                      4. Song M, Wang Y, Shang Z F, et al. Bystander autophagy mediated by radiation-induced exosomal miR-7-5p in non-targeted human bronchial epithelial cells:[J]. Sci Rep, 2016, 6:3016

                      Q1:外泌體的提取方法有哪些?
                      A:外泌體的提取/富集方法有超高速離心,密度梯度離心,流式、磁珠篩選,高分子聚合物等。需要根據樣品類型的不同選擇不同的提取方法,這四類提取方法的外泌體產量、純度以及所需樣品量均不同,需要根據實際情況選擇對應的提取方法。

                      Q2:如何進行外泌體鑒定?
                      A:外泌體鑒定目前采用的是電鏡和West-blot。典型的外泌體電鏡觀察圖是30-100nm 大小的球形或碗形囊泡。West-blot鑒定時可以選擇外泌體特異性蛋白做 West-blot 鑒定。 WB 可以選擇最多的蛋白一般是和 MVBs 合成相關的蛋白(Alix、 TSG101)及四次跨膜蛋白(CD9, CD63,CD81, CD82),同時 WB 時能做 non exosome marker 最好,比如,GRP94, EEA1,Cytochrome c, GM130, PMP70, Calreticulin, prohibitin 等,這些蛋白都是 exosome 沒
                      有,細胞總蛋白中才有。

                      非靶向人類支氣管上皮細胞旁自噬由輻射誘導的外泌體miR-7-5p介導


                      研究背景
                      輻射誘導的旁效應(RIBE)描述了一組非靶向細胞接收輻照細胞旁信號的生物學效應。在放射治療中,RIBE會給癌旁正常組織帶來潛在危害,具有比預想更高的風險。從輻照細胞到細胞外微環境,某些物質的過量釋放會造成有害的影響。例如,細胞因子和活性氧已被證實通過細胞外介質或縫隙連接參與RIBE過程。然而,RIBE介導的信號和細胞間信息通路尚不完全清楚。


                      研究結果
                      在這項研究中,運用miRNA微流體芯片對外泌體miRNA進行了差異表達譜分析。研究人員首次從受2Gy γ射線照射的人支氣管上皮BEP2D細胞的外泌體中鑒定出一組差異表達的miRNA。其中,外泌體中的miR-7-5p被發現誘導受體細胞自噬。外泌體介導的自噬明顯被miR-7-5p抑制劑減弱。此外,我們的數據表明,由外泌體miR-7-5p誘導的自噬與EGFR PI3K/AKT/mTOR信號通路相關。同時,研究結果支持外泌體參與RIBE信號傳播到旁細胞的過程。其中外泌體miR-7-5p是旁自噬的重要介質。


                       
                      圖 受體BEP2D細胞通過外泌體miR-7-5p誘導旁自噬
                      參考文獻
                      Song M, Wang Y, Shang ZF, Liu XD, Xie DF, Wang Q, Guan H, Zhou PK. (2016) Bystander autophagy mediated by radiation-induced exosomal miR-7-5p in non-targeted human bronchial epithelial cells. Scientific Reports. 6:30165.

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